VX2兔肝移植肿瘤模型的制作方法

本发明涉及一种vx2兔肝移植肿瘤模型，属于生物医学技术领域。

背景技术：

Hepatocellular carcinoma, hepatocellularcarcinoma, hcc 是最常见的恶性肿瘤之一。其全球发病率在男性中排名第五，在肿瘤死亡率中排名第二，在女性发病率中排名第七。排名第六。其中约85%发生在发展中国家，尤其是东南亚和非洲肝病毒和乙肝病毒流行的地区。中国肝癌发病率占全球肝癌发病率的46.6%。早期肝癌通常没有明显的症状。除了少数可以接受根治性治疗的早期肝癌患者外，绝大多数肝癌患者被发现时已处于中晚期，失去了进行根治性手术的机会。经导管动脉化疗栓塞，tace是巴塞罗那临床肝癌晚期肝癌患者使用最广泛的治疗方法，bclc分期。与正常肝组织不同，肝癌约90%的血供通常来自肝动脉，只有不到10%来自门静脉，这为tace治疗提供了理论依据。在模拟人体tace手术中，兔vx2肝肿瘤模型具有不可替代的优势，也是介入领域实验研究的首选动物模型。

vx2 细胞系是由shope 病毒诱导的兔皮肤鳞状细胞癌建立的肿瘤细胞系，经过数十次传代。其特点主要有：肿瘤形成率高，肿瘤生长快，血供差，血供不足。大多数肿瘤和病理类型是鳞状细胞癌。兔肝移植瘤的血供与人肝癌相似，均主要由肝动脉供血。是肝癌介入治疗实验常用的荷瘤动物模型。目前家兔vx2肝肿瘤模型中常用的肿瘤种植方法有：开腹下成瘤、经皮超声和CT引导下肿瘤细胞悬液注射。目前实验方法的问题是开腹：时间长，熟练的手术开腹缝合兔子需要1小时；开放性肿瘤损伤较大，术后极易发生腹壁种植转移。极大地影响了后期的介入实验，最终影响了实验结束时的标本选择。但超声引导下穿刺细胞悬液注射法成瘤率低，单瘤成瘤效果差，易发生腹腔播散。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是：现有技术中兔vx2肝肿瘤模型并发症多，成瘤率低兔肝，单个成瘤效果差，易发生腹部播散，手术费时肿瘤接种方法等问题。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种构建vx2兔肝移植肿瘤模型的方法，包括以下步骤：

第一步：制备肌肉注射麻醉剂，麻醉剂浓度为3%戊巴比妥钠，用量为1ml/kg；

第2步：将vx2瘤块肌肉注射成1×1×1mm3大小的瘤块，麻醉后接种幼兔形成瘤。兔子大腿肌肉部分；

第3步：取第2步从肿瘤形成中获得的vx2肿瘤组织，快速保存在4°C pbs中。细胞手术台将肿瘤周围的肌肉组织切除兔肝，得到肿瘤块，将肿瘤块切成1×1×1mm3大小，移植入健康成年兔肝脏进行种植。

本发明还提供了一种vx2兔肝移植肿瘤模型，采用上述vx2兔肝移植肿瘤模型的构建方法构建而成。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的vx2兔肝移植肿瘤模型成瘤率高。肿瘤形成通常表现为单个肿瘤，腹腔着床转移和腹腔感染的概率较低，有利于后续实验研究。

具体实现方法

为了使本发明更易于理解，下面对优选实施例进行详细说明。

一个vx2兔肝移植肿瘤模型，其构建方法包括以下步骤：

第一步：Vx2肿瘤块荷瘤兔肿瘤形成

首先选择1000g左右的新西兰大白兔作为荷瘤兔。幼兔的免疫系统尚不完善，容易形成肌肉瘤。兔麻醉剂制剂，戊巴比妥钠粉剂浓度3%3g/100mlns，麻醉剂用量1ml/kg，肌肉注射后约10分钟见效；优点：一是操作简单，一个人即可快速完成。它不需要特殊的固定；其次，比静脉注射更重要的是不会因为药物进入血液过快而导致兔子死亡；最后，3%制剂，肌注液总量少，不会引起肌肉水肿。麻醉生效后，刮去大腿上的兔毛。如有可能，使用脱毛膏去除毛发，以减少毛皮对手术区域的影响；剃须完成后，对局部皮肤进行消毒。

然后对瘤块进行处理，将瘤块切成1×1×1mm3大小的瘤块，用1ml注射器将其吸入管内，用18g针穿刺皮肤，将穿刺针放入兔体内大腿两侧肌肉，进入肌肉深度0.5cm，注射瘤块后局部压迫止血；等待2周肿瘤形成。

第 2 步：Vx2 肿瘤块植入肝脏

在荷瘤兔中等待2周后，肌内肿瘤直径约为1cm。局部脱毛消毒后，切开皮肤，分离周围组织，游离肿瘤，快速保存于4℃pbs。细胞手术台切除肿瘤周围的肌肉。组织组织，将瘤块切成1×1×1mm3大小备用；健康兔3.5kg成年新西兰白兔，麻醉后，腹部脱毛消毒，穿刺点局部利多卡因局部麻醉；将肿瘤块通过使用眼科镊子插入超声穿刺针的尖端。在超声引导下，穿刺兔子肝脏的左叶。选择肝门附近较厚的区域。穿刺针进入肝脏深度为 1 厘米。确定位置后，插入超声穿刺针芯。将针头内的肿瘤组织推入肝实质，拔出穿刺针，按压止血。等待2周形成肿瘤，形成肿瘤后得到vx2兔肝移植肿瘤模型。

上述实施例仅为本发明的优选实施例而已，并不以任何形式或实质限制本发明。需要指出的是，对于本领域普通技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，可以进行多种改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

技术特点：

1.一种vx2兔肝移植肿瘤模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

第一步：制备肌肉注射麻醉剂，麻醉剂浓度为3%戊巴比妥钠，用量为1ml/kg；

第2步：将vx2瘤块肌肉注射成1×1×1mm3大小的瘤块，麻醉后接种幼兔形成瘤。兔子大腿肌肉部分；

第3步：取第2步从肿瘤形成中获得的vx2肿瘤组织，快速保存在4°C pbs中。细胞手术台将肿瘤周围的肌肉组织切除，得到肿瘤块，将肿瘤块切成1×1×1mm3大小，移植入健康成年兔肝脏进行种植。

2.一种vx2兔肝移植肿瘤模型，其特征在于采用权利要求1所述的vx2兔肝移植肿瘤模型的构建方法构建而成。

技术总结

本发明公开了一种VX2兔肝移植肿瘤模型。本发明VX2兔肝移植肿瘤模型的构建方法包括：首先配制肌内注射麻醉剂兔肝，麻醉剂浓度为3％戊巴比妥钠，用量为1mL/kg；将肌注VX2瘤块处理成1×1×1mm3大小的瘤块，麻醉下接种幼兔形成瘤。肿瘤形成部位为幼兔双侧大腿肌肉；分离的 VX2 肿瘤组织在 4°C 下快速储存在 PBS 中。细胞手术台去除肿瘤周围的肌肉组织，将肿瘤块切成1×1×1mm3大小，移植到健康成年兔的肝脏中进行种植。本发明的VX2兔肝移植肿瘤模型成瘤率高。肿瘤形成通常表现为单个肿瘤，腹腔着床转移和腹腔感染的概率较低，有利于后续实验研究。

技术研发人员：杨敏杰；杜楠；张文;罗建军；马景荣；张子涵；周鑫；颜志平

受保护技术用户：复旦大学附属中山医院

技术研发日：2021.06.10

技术公告日期：2021.08.31